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液氮凍存細(xì)胞種在-80℃低溫冷凍保藏
將菌種保存在-80℃冰箱中，以緩解細(xì)胞生理活動的冷凍。液氮罐制造商分享如下操作步驟：
先做好安瓿管的準(zhǔn)備
安瓿管材料應(yīng)為中性玻璃。清洗安瓿管時，用2%硫酸浸泡一夜。自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性。干燥后，貼上標(biāo)簽，標(biāo)明菌號和時間。加入脫脂棉塞后，在121℃下進行高壓滅菌(15℃)～20)min，備用。
如何利用液氮將菌種冷凍在-80℃
其次，要做好保護劑的選擇準(zhǔn)備
保護劑的類型應(yīng)根據(jù)微生物的類型進行選擇。制備保護劑時，應(yīng)注意其濃度和pH值，以及滅菌方法。如血清，可過濾滅菌;牛奶應(yīng)先脫油，用離心法去除上油，一般在100℃間歇煮2～3次，每次(10～30)min，備用。自增壓液氮罐
今后，要注意微生物保存物的準(zhǔn)備
在*適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下，將細(xì)胞培養(yǎng)到靜止期或成熟期，經(jīng)過純度檢查，與保護劑攪拌均勻，分裝。微生物培養(yǎng)物濃度應(yīng)低于細(xì)胞或細(xì)胞(108-1010)個/ml(大腸桿菌)(Escherichiacoli)例如，為了獲得每毫升1010個活細(xì)胞菌液2ml～2.5mL，只有兩個10ml瓊脂斜坡)。
選擇較長的毛細(xì)滴管，直接滴入安瓿管底部，切記不要濺到上管壁上，每管裝配量約(0.1～0.2)mL，如果是球形安瓿管，則裝載量為半個球。如果是液體培養(yǎng)的微生物，應(yīng)離心去除培養(yǎng)液，然后將培養(yǎng)物與保護劑混合，然后放入安瓿管中。安瓿管的分裝時間應(yīng)盡可能短，*幸運的是(1)～2)ml內(nèi)分裝并預(yù)凍。分裝時應(yīng)注意在無菌環(huán)境中操作。自增壓液氮罐
然后進行凍結(jié)保存
將安瓿管或塑料冷凍管儲存在-80℃的環(huán)境中。
我們還必須知道，如果我們想在冷藏后取出復(fù)蘇方法。從冰箱中取出安瓿管或塑料冷凍管，應(yīng)立即放置38℃～40℃水浴迅速恢復(fù)，適當(dāng)快速搖晃。直到內(nèi)部凍結(jié)完全溶解，約需50s～100s。打開安瓿管或塑料冷凍儲存管，將內(nèi)容物移至適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液中進行培養(yǎng)。
