摘要：乳雙歧桿菌U9是一株具有優良益生功能的乳桿菌。為了保證U9菌株活性，為工業化益生菌制劑生產提供穩定菌種，利用液氮深冷方式對U9菌株進行冷凍保藏。以冷凍存活率為評價指標，對冷凍保護劑種類進行篩選，并對保護劑配方進行正交試驗優化。結果表明，甘油、海藻糖、脫脂乳粉及維生素C4種保護劑能對乳雙歧桿菌U9起到良好的保護作用；正交試驗優化確定的保護劑配方為甘油2%、海藻糖7.5%、脫脂乳粉7.5%、維生素C 0.1%，菌體冷凍后存活率達到94%。氣相液氮罐

乳雙歧桿菌是人體腸道中常見的益生菌，也是世界上被廣泛研究的益生菌菌種之一，在維護人體健康中扮演重要角色。據統計，有300多種科學出版物都對乳雙歧桿菌功能特性進行了描述，其中130多種報道涉及其人體臨床研究。大量報道表明，乳雙歧桿菌的保健作用已經在許多胃腸健康和免疫功能臨床研究中得到了驗證。目前，人們已經把乳雙歧桿菌制備成了發酵乳制品的直投發酵劑、膳食補充劑以及藥用制劑等。

在乳雙歧桿菌工業化使用過程中，菌種活力的保持與工業化生產緊密相關。傳統的保菌方式主要是采用真空冷凍干燥的方法，但存在設備成本較高、菌種存活率低等問題。

因此，探究一種更為簡便的保菌方式顯得尤為重要。液氮深冷保菌方式因其實驗操作簡便、成本較低、菌種活力高等優勢，越發廣泛地應用到菌種保藏中。有研究采用3%甘油、5%海藻糖、5%果糖、8%脫脂乳、0.05%維生素C、0.05%L－谷氨酸（L－ＧLU）作為保護劑配方，對長雙歧桿菌起到良好保護作用，保證在深冷條件下存活率接近100%。針對不同菌株研究特異性冷凍保護劑是菌株深冷保藏的關鍵。

冷凍保護劑分為滲透型、非滲透型、半滲透型和抗氧化型4種，不同類型保護劑的保護機制也不同。氣相液氮罐

液氮深冷冷凍技術，能耗小，安全性高，生產成本低，能較好地提升菌種的存活率，為菌種的保藏提供了更有效便捷的方式。冷凍保藏效果的關鍵在于冷凍保護劑的選擇，通過對保護劑種類進行篩選，確定了甘油、海藻糖、脫脂乳粉和維生素C4種保護劑，它們能夠對乳雙歧桿菌U9在液氮中的冷凍保藏起到良好的保護作用，并借助正交試驗及驗證試驗對保護劑濃度進行優化，確定保護劑配方為2%甘油、7.5%海藻糖、7.5%脫脂乳粉、0.1%維生素C。利用優化后的保護劑配方對乳雙歧桿菌U9進行凍干保護，存活率可達94%，為乳雙歧桿菌U9在工業化生產中的應用提供理論依據。